【操作步骤】

1.  样品制备

用水充分冲洗生肉及生肉制品并吸干水分后， 取大约30- 100mg的样本，置于已灭菌的研钵中，加入液氮充分研磨， 然后按照动物组织基因组提取试剂盒 (如血液/细胞/组合基因组DNA提取试剂盒，天根DP304) 说明书提取核酸。 若样本 提取后不立即检测，也可存于-20℃或-70℃备用，应避免反复冻融。

定性检测：提取的DNA直接作为模板加入PCR反应液中，根据Ct值可以判定样本核酸中是否含有肉源性成分。

半定量检测： 提取的 DNA 经过浓度测量后， 调整核酸浓度为 10ng/μL 进行 PCR，最终根据结果判定表判定其肉源性 成分质量分数。

2.  反应体系配制

(1)体系配制： 从试剂盒中取出试剂室温融化，待试剂完全解冻，颠倒混匀后瞬时离心。 若待检样品数量为 n  (n= 样本数+阳性对照+阴性对照)，则按 n+1 个反应分别配制 A 和 B 两种反应体系。反应体系配制如下表。

(2)体系分装：将上述反应液混匀离心后，按照每管23μL分装于荧光PCR仪适用的PCR管中。

(3) 加样： 每个样品需做A/B两管检测， 分别取步骤1中提取的2μL DNA样品加入到分装好的PCR反应管中， 总反应 体积为25μL 。阴性对照反应管中加入阴性对照2μL ，在A、B阳性对照反应管中加入相应模板2μL。